扫描关注官方微信

标准菌株的购置、验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等!


来源:澳门葡京      发布时间:2020-02-25 10:37     点击率:

  ②标准菌株:至少定义至属或种水平的菌株。按其特征进行分类和描述,有明确的来源。

  各种国际标准、国家标准、行业标准及企业标准等的相关微生物检测,用于验收培养基(包括试剂盒)、验证方法和评估实验操作。

  实验室用菌种一是到国家法定机构采购,二是购买ATCC菌种,三是科研中菌种交流。不管是哪种来源,均统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。选择有资质的标准菌株的合格供应商,每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书,来证明所采购的标准菌株是合格的。

  实验室收到标准菌株,首先应进行符合性感官检查,记录菌株号和标准菌株来源途径信息,确保溯源性清楚。同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。

  ①开启产品包装:先用70%酒精棉擦拭外包装,从凹口处撕开产品外包装,撕掉标签上的拉片,将其贴于菌株接收、保存记录序号前面。

  ②复活:选择合适的培养基和培养条件(根据生产商说明或有关技术通则见 附录)进行复活。菌种的首次活化最好是在非选择性琼脂培养基上,除非特殊情况或特别推荐,一般不用液体培养基。冻干菌株的传代次数不得超过5代,从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。

  捏管帽处安瓿瓶(仅一次)使其释放水合液体。垂直握住安瓿瓶并轻拍之,使液体流入含小球的管底。通过挤捏压碎小球使其与液体混合,立即将拭子浸于水合液体。挤压并旋转拭子,接种于初级培养平板,接种圈的直径约为25mm,用一无菌接种环在先前接种区域划线次,促使分离出单菌落。同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管,副溶血性弧菌接种3%氯化钠菌胰蛋白胨大豆肉汤管。将接种好的平板和管立即进行培养。细菌培养温度通常为25℃或37℃。多数冻干菌株会在几天后长出,但是少数菌会表现出延滞期延长的现象,需要将正常培养时间加倍。复活后的菌株为F1代。

  ③将TSB生长的浓菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出,将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代。将平板上生长的良好菌株接种于营养琼脂斜面(副溶血性弧菌用3%氯化钠营养琼脂)36℃培养24h当作工作菌株,记录为F3代。

  用无菌接种环取上述培养物,在相应的培养基平板(营养琼脂、大豆胰蛋白胨琼脂)上或相应的细菌鉴别平板(如伊红美蓝、麦康凯、BP等上划线分离单个菌落,置适宜条件下培养(若该类微生物为厌氧菌,则培养条件应为厌氧条件)。以同样方法取真菌和酵母菌至SDA(萨布罗培养基)平板上或玫瑰红钠培养基平板上,23~28℃下培养7d;培养后观察是否具有典型的菌落状态,然后挑取单一纯菌落,进行革兰染色、镜检,观察其染色特征及菌体形态以确定菌种。

  假如在该平板上发现有其他菌落生长,则说明操作有污染或菌种不纯。要将该污染培养物做灭菌处理,寻找原因,重新分离挑选纯菌落。

  所有菌种均由实验室专人(双人双锁)保存于专用冰箱或其它保存方式。要建立菌种登记台帐,详细记录菌种采集、保管、制备、使用、处置情况;每一种菌种一定要有检测鉴定报告(具体的的鉴定方法见ATCC提供的菌种证书方法);

  将复苏后肉汤与灭菌甘油按15%甘油比例(肉汤8.5mL+甘油1.5mL)混合,-30 ℃冻存,(可用2mL冻存管冻存多管),作为保藏储备菌株F1代,也可使用商品化的菌种保存管(青岛海博的瓷株菌株保存管)。

  ②标准储备菌株每转接一次须进行确认。(确认方法一般为他们各自独有的形态,在鉴别培养基上的形态)

  a.配制营养琼脂培养基(溶血性弧菌加3%氯化钠 ),121℃高压灭菌15分钟后分装在试管内,冷却后备用。

  菌种代数的计算为干粉菌种为第0代,转接一次加一代。具体标识为:例单增李斯特氏菌第0代,标识为DZ-0,第一代标识为DZ-01第一代有12支,则DZ-01-01、……、DZ-01-12;并标明日期:如2016.02.13这样填写。

  ②将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中2~8℃保存。每支保存菌种需标明菌名、标准编号、传次、传代日期。

  将分纯的待存菌接种于适宜的固体斜面培养基上,得到充分生长后,用封口膜封口,贴上标签,保存于4℃的冰箱中。此法操作简单、使用方便、不需要特殊设备,是实验室菌种保存最常用的方法。但保存时间短,一般每个月都要移种1次,而且菌种容易变异,所以此方法只适合实验室短期实验菌株的保存。

  用接种针将以分纯的待存菌,穿刺接种于半固体中,放入培养箱培养后出,封上无菌的液体石蜡,贴上标签,放4℃冰箱保存。此方法简便易操作,不需特殊设备、技术难度不大,但保存的时间不长,一般只能保存1年以内,而且对抵抗力弱以及一些特殊菌种大概只能存活3~6个月,需要频繁的传代,这样很容易使菌株受到污染、变异。所以此方法不适用菌种的长期保存,只适合实验室一些要求不高的菌种的短期保存。

  将液体石蜡灭菌,放于37℃恒温箱中,使水汽蒸发掉备用。再将已分纯的待存菌 在最适宜的斜面培养基中培养,使得到健壮的菌体,用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡,注入已长好的斜面培养基上,用量以高出斜面1cm为准,将试管直立,贴上标签,置4℃下保存。此法制作简单,不需要特殊设备,菌种可以保存1年左右不需要经常移种,缺点是保存的时候需要直立放置。此方法适合实验室短期保存,而且保存时需要一定的空间。

  将待存菌经平板划线分离后,挑单个菌落用接种针反复穿刺接种到高固体琼脂培养基中,经培养箱培养后取出,用灭菌过的液体石蜡滴加到半固体琼菌种管表层约0.5cm高度,贴上标签,存放4℃冰箱。此法操作简便,不需要特殊设备,效果好,可以保存菌株1~2年。所以适合实验室菌株的较长期的保存。

  将已分纯的待存菌用无菌镊子镊取纸片,在纸片上刮取4~5个菌落,入冻存管内,盖上盖子后用封口胶布封住边缘,贴上标签,放入冰箱冷冻保存(-20℃左右)。此方法具有操作简单、不需特殊设备、经济实用、保存空间小等而且保存时间至少2年,但对一些营养要求比较高的菌种,存活率不理想。所以方法适合实验室一些营养要求不高的菌种较长时间的保存。

  将已分纯的待存菌接种于肉汤中,37℃培养18~24h,然后按5份肉汤溶液、2份甘油-生理盐水保存液的比例分装于灭菌的微量离心管或细胞冻存管中,贴上标签,置-80℃~-20℃冰箱保存。此法操作简便,不需要特殊设备,效果好,可以保存菌种3年左右,无变异现象,而且此方法还可以保存一些要求较高的特殊菌种,适用范围广。所以此方法适合实验室普通菌种或特殊菌种的较长期的保存。

      澳门葡京,葡京娱乐,葡京平台
上一篇:陈宜瑜院士:推进“后 2020 时代”全球生物多样性保护 下一篇:2020福建生物工程职业技术学院招聘教师10人公告

  • 走进我们

  • 新闻动态

  • 投资者关系

  • 人才招聘

成都澳门葡京科技实业股份有限公司

地址:中国.四川省成都高新区(西区)天勤东街66号

电话:028-66679666 传真:028-66679669

Copyright © 2016 All Rights Reserved .成都澳门葡京科技实业股份有限公司 版权所有
网站地图
国内各大区联系方式

西北大区(新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙古、陕西)

大区经理:张晖妩 联系电话:13281832624 028-66679675

西南大区(四川、重庆、贵州、云南、西藏)

大区经理:刘羽 联系电话:18681370690 028-66679653

北方大区(黑龙江、吉林、辽宁、北京、天津、河北、山西)

大区经理:姜小鹏 联系电话:13981936900 028-66679655

华东大区(山东、江苏、安徽、上海、浙江、河南)

大区经理:姜小鹏 联系电话:13981936900 028-66679655

南方大区(湖北、湖南、江西、福建、广东、广西、海南)

大区经理:邢梦松 联系电话:13312829251

国贸分公司

总经理:姜姝悦

Tel:+86-28-66679718

Fax:+86-28-66679716

Mobile:+86-0-13408668728

Email:www.xcmgcrane.com

www.xcmgcrane.com

www.xcmgcrane.com