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原理 用微生物法快速测定牛乳中是否含有大量抗生素


来源:澳门葡京      发布时间:2019-10-07 09:49     点击率:

  微生物检测法(例如Delvotest )的基础是用细菌是否被抗生素抑制来检测抗生素是否存在。为简化起见,这类检测方法通常检测的是多种抗生素的接近于MRL(最大残留极限)的极限值,属于定性检测(根据一个已知的极限值判定有或无抗生素)。

  快速检测方法运用了多种不同的技术,在几分钟内就能检测出是否含有某一类抗生素,但不定量。使用最多的是针对β-内酰胺类抗生素的检测法,但是也有类似的针对四环素类或其他类型抗生素的检测方法。

  特异性检测方法,运用HPLC(高效液相色谱)等技术,检测特定的分子并进行定量。这类方法有可能同时检测几种预定的分子。

  鉴定并定量的方法目前正在出现,基于LC-MS-MS(液相色谱和质谱)等原理。这类方法通常是用作快速筛选检测后的验证手段。

  微生物检测法,与某些快速检测一样,可以由非专业人士操作,而其他检测方法都只能在相应的实验室由专业的技术员操作。微生物检测或快速检测方法成本只有几欧元,而其他方法检测一个待测分子的成本需要100欧元左右。

  必须提醒的是微生物检测法早在多年前就被开发出来,用来保证牛奶中不含有可能会破环乳酸发酵的抑制剂,是适合加工的。事实上,加工方面的限制早就引领着乳品工业去检测牛奶中的抗生素。

  这类微生物检测方法,非常容易使用,已经“工业化“并已大规模的应用于各种场合:在分析原料奶的实验室,在乳品工业的实验室,甚至在农场上。

  对从一种分子到另一种分子具有不同的灵敏度:这里的这个灵敏度(检测极限)也依赖于所选择的细菌对不同抗生素的灵敏性。

  可能的“附加“作用:即使关于这一点文献记载很少,但不同的抗生素同时存在可能导致对测试细菌有附加(甚至是协同)作用。

  到目前为止,世界上普遍使用的是Delvotest (DSM)和BrTest。很多方法都从此拷贝而来(Copan, Eclipse)。注意几乎所有这些方法都是使用同一种细菌:嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermo-philus)。也有几种方法用的是其他细菌,如Valio’s T101使用的是乳酸链球菌(lactic streptococci)。举例来说,据估计在法国每年约有5,000,000 份Delvotest微生物测试盒用于原料奶检测。

  某些国家,为了提高某些分子的灵敏度,使用一“组“菌,每一种菌对不同的待测抗生素敏感性高低不同,在不同的培养皿中同时使用,可以检测到更多的分子并能够提供一个初步的方向。注意在非正常奶中存在的天然抑制剂可能会导致阳性结果,对于来源于患有乳腺炎的奶牛的牛奶或初乳尤其如此。

  对这类检测方法的定义是从其性能角度出发,而不是根据其所用的各种技术。事实上,所有这些检测方法都可以在几分钟内出具结果(有或无),一般都是对于某一类的抗生素。这类测试通常在其他测试之前使用,用于“卸载测试“:收奶车卸载之前进行测试,结果为阴性才可以卸载,结果为阳性则一般需要进行新的测试。

  大多数情况下,这类测试仅用于检测β-内酰胺类抗生素,这主要有两个原因:一是这一类抗生素是养殖场上最经常使用的抗生素,二是这类抗生素能够污染大量的牛奶(参见稀释和污染力的概念)。

  随着电子学和信息技术的进步,这类检测法在二十世纪80年代发展起来,使得性能越来越好的高效液相色谱(HPLC)、紫外-可见检测系统和荧光检测系统得以发展。这类方法的检测限非常低:得到的结果可以决定样品与最大残留极限(MRL)的一致性。这些方法的局限就是它们的测量范围:有多少类抗生素就需要多少种方法。某些抗生素在紫外区没有吸收,因此难以鉴定。

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