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HiCrome显色培养基与常规培养体系分离鉴定泌尿病原体的对比及评价


来源:澳门葡京      发布时间:2020-01-17 00:38     点击率:

  原标题:HiCrome显色培养基与常规培养体系分离鉴定泌尿病原体的对比及评价

  尿液是临床实验室最常见的培养样本。本实验比较了HiCrome-UTI显色琼脂(货号:MV1353,品名:HiCrome UTI HiVeg Agar,HiMedia公司生产)与血琼脂(BA)和麦康凯琼脂(MAC)的性能,对尿液中的细菌进行分离和初步鉴定。

  尿路感染是重要的临床疾病,全球范围内大量的门诊病人和住院病人都与尿路感染有关,尿液则成为了最常用的培养样本。

  尿路感染的病因诊断,通常需要在标准琼脂培养基上进行定量的培养,尿样本中只有20%到30%的细菌会显著生长。主要的致病因子是大肠杆菌、克雷伯氏菌属、单胞菌属、变形杆菌属、肠球菌属和葡萄球菌属等。

  传统培养基,如血琼脂(BA)和MAC琼脂常被一起使用,以增加实验的准确性。

  血琼脂作为一种浓缩培养基,可以支持大多数泌尿病原体的生长,但其在细菌鉴定方面的性能非常差。同样,在Mac和Cled琼脂上也可以区分乳糖发酵菌和非发酵菌,但进一步的物种鉴定需要进一步培养或不同的生化试验,延长了鉴定时间,增加了成本。此外,它们促进病原体生长的能力有限,并不适合作为理想的初级分离方法。

  试验方法:对2012年1月至12月在孟加拉国拉贾希市伊斯兰堡医学院附属医院采集的443例尿样本进行培养。将脓细胞≥5/hpf的尿液标本同时接种到血琼脂(BA)、MAC琼脂和HiCrome琼脂(CA)培养基上,并在37℃下进行培养过夜,比较不同培养基的分离率和细菌种类的推测鉴定。

  试验结果:共培养出189个(42.67%)阳性平板上的199株细菌,其中单微生物培养179株(40.40%),多微生物培养10株(2.26%)。HiCrome-UTI琼脂和血琼脂培养基生长率均为100%,而MAC琼脂培养基的生长率为151(75.88%)。作为尿液培养基,HiCrome UTI琼脂(97.49%)的推定鉴定率明显高于MAC琼脂(67.34%)(P0.001)。在199个分离菌株中,大肠杆菌是从118个(59.30%)样本中分离出的主要泌尿系病原体,其在CA、MAC和BA上的鉴定率分别为95.76%、93.22%和5.93%。所有10(100%)个多微生物在CA上旺盛生长且肉眼可见,而在每个BA和MAC上只有1个(10%)。

  试验结论:与传统培养基相比,HiCrome UTI琼脂用作尿培养基的分离率和鉴定率较高。它在促进多微生物生长,以及易于通过独特的菌落颜色快速识别方面的特征是独一无二的。

  显色琼脂(CA)培养基越来越多地被用作一种多用途的原代培养工具,以更好地分离细菌种类并从临床标本中鉴别。7种生色底物被纳入这些培养基中,这些底物被具有特殊功能的细菌酶分解而显色。这种选择性培养基不仅支持所有泌尿病原体的生长,而且还可以更容易地诊断混合细菌感染。在一些研究中,将显色培养基与传统培养基进行比较,其优点包括减少鉴定时间、减少工作量、更容易识别混合生长微生物,以及减少细菌鉴定的生化试验数量等。所有这些因素都可直接降低成本。

  HiCrome UTI琼脂是一种显色培养基,有助于快速分离和鉴别大多数泌尿病原体,包括混合微生物的各种物种。大肠杆菌菌落是最常见的泌尿病原体,由于其含有β-半乳糖苷酶,裂解显色底物而呈粉红色,在该培养基上被明确的鉴定,无需进一步的生化试验。产生β-葡萄糖苷酶的菌株,如肠球菌和沙雷雷克雷伯氏肠杆菌群,由于葡萄糖苷水解包含在培养基中的显色底物而形成蓝色菌落。同样地,培养基中的色氨酸可用于检测变形菌群。变形菌群生产色氨酸脱氨酶,裂解色氨酸后呈现弥漫的棕色。假单胞菌属产生无色菌落,腐生菌产生白色菌落。某些后续的鉴定试验,如过氧化氢酶、氧化酶和吲哚试验,可直接从HiCrome-UTI琼脂上的菌落中进行,也可以不用传代到另一种基本培养基上进行抗生素敏感性试验。

  尿液培养:所有尿液样本均无菌接种到HiCrome UTI琼脂、血琼脂和MacConkey琼脂培养基上,使用28g的校准金属丝环,内径3.26 mm,含0.004 ml尿液。平板在37℃有氧培养,过夜培养后,通过菌落计数(100个菌落的生长等于105个菌落形成单位(cfu/ml尿),检查有无明显的细菌尿症)。

  细菌感染的显著性标准:有症状的妇女体内有大于105 cfu/ml的非大肠菌群或大于102 cfu/ml的大肠菌群;有症状的病人体内细菌含量大于103cfu/ml。

  鉴定:根据制造商描述的菌落形态和颜色,在HiCrome UTI琼脂上进行细菌生长的鉴定。Mac琼脂和BA上的菌落也根据每个泌尿病原体的菌落特征进行鉴定。使用标准鉴定方案(如革兰氏染色、运动试验、过氧化氢酶试验、凝固酶试验、氧化酶试验和其他适用于菌株的相关生化试验)对菌株进行最终鉴定。

  统计分析:所有数据均输入社会科学统计包(SPSS)16.0版。对分类变量(如细菌类型、分离率、假设鉴定和培养中多微生物生长率)生成了百分比频率。采用卡方检验(x2)计算P值,比较CA和MAC的假定识别率。

  在443份尿液培养中,189份(42.67%)有明显的细菌生长,254份(57.33%)无生长。培养阳性标本中,单菌生长179例(40.41%),两种菌混合生长10例(2.26%)。有118例样本(59.30%)分离出大肠杆菌,其次是腐生葡萄球菌38例(19.09%)、肠球菌23例(11.56%)、克雷伯氏菌11例(5.53%)、假单胞菌4例(2.01%)、变形杆菌3例(1.51%)和肠杆菌属2例(1.00%)。

  Hicrome UTI琼脂和血琼脂培养基均支持100%细菌生长,而Mac琼脂培养基中有151例(75.88%)细菌生长。

  根据原代培养板上的菌落特征对199株细菌进行推测性鉴定,Hicrome UTI琼脂上可鉴定194株(97.49%),Mac琼脂上可鉴定134株(67.34%),BA上可鉴定73株(36.68%)。Hicrome UTI琼脂的推测鉴定率明显高于作为主要尿培养基的Mac琼脂。

  所有10例(100%)混合菌群仅在Hicrome-Uti琼脂培养基上被明确鉴定。而除大肠杆菌和变形杆菌属的单一菌属外,所有其他混合细菌均不能在Mac和血琼脂培养基上生长及鉴定。

  对尿液中的细菌分离及鉴定是一项耗时的工作,在使用传统的培养基如血琼脂、MAc琼脂或Cled琼脂时需要大量的时间。与之相反,Hicrome-UTI琼脂培养基的分离率较高,对泌尿病原体的鉴定具有统一的鉴定标准,因此比传统培养基优越得多。由于无需下一步的细菌鉴定试验,显色培养基大大减少了实验室工作量,同时具有较高的培养鉴定效率。

  血琼脂是一种浓缩培养基,Hicrome UTI琼脂也含有所有必需的营养素,以支持可能的泌尿病原体的生长,这就是为什么所有的分离株都可以在这两种培养基上生长的原因。

  就细菌的初步鉴定而言,与传统培养基相比,HiCrome UTI琼脂上鉴定的细菌种类比例明显较高,可在显色培养基上观察每一种细菌独特的菌落颜色,特别是针对大肠杆菌、克雷伯氏杆菌、肠球菌和肠杆菌属。显色培养基也能鉴定一些非发酵乳糖的大肠杆菌,而MAC琼脂则不行。此外,Hicrome UTI琼脂还具有限制变形杆菌、克雷伯氏菌和大肠杆菌粘液菌株等分离株扩散生长的优点,因此,当存在混合菌群时,显色培养基能够更高效地检测尿道病原体。

  HiCrome UTI琼脂有较高的分离率,可特异性识别混合菌群,从而使结果评估更准确。由于BA和MAC琼脂在菌落分离方面的局限性,其对混合菌群的鉴定率非常低。而HiCrome UTI琼脂更有助于具体识别尿液样本中的致病菌,从而减少使用不必要的抗生素。此外,与传统培养基相比,HiCrome UTI琼脂费时更少。

  本研究的总体结果表明,与传统培养体系相比,Hicrome UTI琼脂提供了一种更高效、省时的方法,能够可靠地鉴定大多数泌尿系统病原体,并分离原代培养皿中的混合细菌。它简化了尿液微生物培养步骤,减少了技术人员的工作量,能够显著的提高鉴定效率以及降低成本。返回搜狐,查看更多

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